龍血竭-β-環糊精包合物凝膠的藥效學研究

來源: www.411242.buzz 發布時間:2017-03-09 論文字數:23142字
論文編號: sb2017030711081816310 論文語言:中文 論文類型:碩士畢業論文
本論文是藥學論文,筆者將其制成包合物后,增加其溶解度,提高其穩定性,再將包合物制成凝膠劑。包合物凝膠在釋放藥物的同時,具有穩定不變的體外透皮滲透速率,且不增加體內血藥濃度
引言
 
燒燙傷是人們在日常生活中常見的一種意外傷害,可以由高溫、電、化學藥品等對皮膚或肉體造成的傷害。燒燙傷按深度一般分為三度。本實驗主要研究的二度燙傷。二度燙傷可分為淺二度和深二度。淺二度僅傷及皮膚真皮淺層,部分生發層健存。因滲出液較多,其水泡也較飽滿,水泡破裂后創面滲出液明顯。創底腫脹發紅;感覺劇烈疼痛;皮膚溫度增高,若無感染等并發癥,一般 2 周可恢復。愈合后不留疤痕,短期內可能有色素沉著,可恢復皮膚功能。深二度傷及真皮深層,有殘留皮膚附件。因變質的表層組織變厚,水泡較小或扁薄,皮膚感覺稍遲鈍,皮膚溫度也可能稍低。去除表皮后創面呈淺紅,可能有網狀栓塞血管生成;皮膚表面滲出液少,但底部腫脹明顯。若無感染等并發癥,一般 3~4 周可恢復。因修復過程中間有部分肉芽組織生成,故留有疤痕,但保存了基本皮膚功能。皮膚除紅腫熱痛等感覺還會出現水泡。燒燙傷不僅給患者身心帶來創傷,同時也給生活帶來不便。
創面愈合過程包括炎癥反應期、細胞增殖期和結構重塑期[1]。創面損傷后,中性粒細胞和單核巨噬細胞等炎癥細胞聚集到創面,創面內的單核巨噬細胞和內皮細胞轉移至創面,并不斷增殖。增殖過程后,內皮細胞和成纖維細胞合成多種生長因子,進一步促進創面愈合。EGF(表皮細胞生長因子)和 bFGF(成纖維細胞生長因子)是生長因子中重要組成部分。EGF 是多肽類物質,可刺激表皮角質細胞及纖維細胞增殖,促進新血管的形成和核酸蛋白質的合成。bFGF 促進成纖維細胞和內皮細胞增殖,促進肉芽組織形成和新生毛細血管化[2-4]。
燒燙傷可能發生在全身各個部位,局部用藥優于全身用藥[5],因此在燒燙傷治療中外用藥物占重要地位[6]。常用于治療燒燙傷的外用藥有中藥及中藥復方制劑,天然藥物,抗菌類藥物,糖胺聚糖(glycosaminoglycan,GAGs)類藥物,生物因子類藥物,酶制劑及局部止痛藥物。其中中藥及其復方制劑主要以清熱解毒、活血止痛、消腫、斂瘡生肌、為主,常用藥有紫草、地榆、黃芩、黃連、黃柏、石膏、冰片等[7]。中藥治療的優勢是在中、小面積Ⅱ度以下燒燙傷。天然藥物主要是將植物中提取物用于治療燒燙傷??咕愃幬镏饕怯糜诜乐谷砀腥?,減少細菌在創面的生長繁殖,外用抗菌藥物主要有磺胺類、抗生素類、碘胺類、喹諾酮類、金屬鹽類等?;前奉惪咕幹委煙隣C傷主要是磺胺嘧啶銀和磺胺米隆?;前粪奏ゃy可抑制綠膿桿菌生成,能促進創面愈合,適用于Ⅱ度或Ⅲ度燒燙傷?;前访茁≈饕饔糜诰G膿桿菌、金黃色葡萄球菌和破傷風桿菌,可以快速滲入創面及結痂中,促進創面皮膚生長愈合提高植皮成活率,適用于大面積創傷后的感染。糖胺聚糖類藥物主要包括肝素、硫酸肝素、硫酸軟骨素、硫酸角質素、透明質酸和殼聚糖等。糖胺聚糖具有抗凝血抗炎功效,能增強炎癥細胞作用,促進肉芽組織的生成。生長因子類藥物包括堿性成纖維生長因子和表皮生長因子。堿性成纖維生長因子是對細胞生長分化有調節作用的活性多肽,對創面細胞有促進增殖分裂的作用,加快創面愈合,作用范圍廣。表皮細胞生長因子主要刺激上皮細胞和成纖維細胞的生成,加快創面愈合。酶制劑中使用最廣的是膠原酶,其可分解創面的失活組織而達到酶學清創的作用,可促進肉芽組織及上皮細胞組織的形成,促進創面愈合。局部止痛藥用于燒燙傷產生的劇烈疼痛,但副作用大且有成癮性。
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第一部分龍血竭-β-環糊精包合物凝膠的制備
 
1 實驗材料
龍血竭原粉(昆明市延安醫院提供)
β-環糊精(曲阜天利制藥有限公司,生產批號:20130310);
卡波姆-934(上海人民制藥廠,批號 000406);
乙醇(天津市風船化學試劑科技有限公司,生產批號:20130903,分析純);
三乙醇胺(天津市恒興化學試劑制造有限公司,生產批號:20120610);
甘油(昆明振華制藥廠);
UV-2401PC 紫外分光光度計(日本島津公司);
電熱恒溫水浴鍋(北京永光明醫療儀器廠);
FA2004 電子分析天平(上海精密科學儀器有限公司);
IKAC-MAGHS4 加熱磁力攪拌器(艾卡儀器設備有限公司)
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2 實驗方法及結果
2.1 龍血竭的成分與性質
龍血竭的主要化學成分為黃酮類、酚類、甾醇類、甾體皂苷類等[13]。黃酮類化合物主要有黃酮、二輕黃酮、二氫查耳酮、查爾酮、黃烷等。二氫查耳酮類化合物是龍血竭中十分豐富的化合物,分為龍血素 A(4'-羥基-2,4-二甲氧基二氫查耳酮),龍血素 B(4'-羥基-2,4,6-三甲氧基二氫查耳酮),龍血素 C(4,4'-二羥基-2-甲氧基二氫查耳酮)和龍血素 D(6-甲氧基-2,4-二甲氧基二氫查耳酮)。龍血竭性溫、平,味甘、咸,無毒,入血分,歸心、肝、腎三經,有活血化瘀、消腫止痛、收斂止血、軟堅散結、生肌斂瘡等功效,主要用于外傷出血,跌打損傷,潰瘍不斂,瘀滯作痛等癥狀。2.2 龍血竭-β-環糊精包合物的制備
2.2.1 正交試驗設計
選擇包合物中收率和包合率作為篩選包合物最佳工藝條件的指標,其計算公式如下:
收率%=包合物實際質量(g)/β-CD 加入量(g)+加藥量(g) ×100%
包合率%=包合物中含藥量(g)/投藥量(g)×100%
權重系數為 0.3:0.7。
根據參考文獻[14-16]選擇包合攪拌時間,包合溫度,龍血竭和β-環糊精物料比作為考察因素,選用 L9(33)進行正交試驗,因素水平見表 1。

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第二部分 龍血竭-β-環糊精包合物凝膠的藥效學研究
1 實驗材料………………………………………………………………………………………26
2 實驗方法及結果
2.1 統計學方法…………………………………………………………………………………26
2.2 對Ⅱ度燙傷的小鼠皮膚愈合作用…………………………………………………………26
2.3 對小鼠皮膚刺激性試驗……………………………………………………………………30
2.4 對冰醋酸致小鼠扭體的止痛作用…………………………………………………………30
 
第二部分龍血竭-β-環糊精包合物凝膠藥效學研究
 
1 實驗材料
重組人表皮生長因子凝膠(中國·桂林華諾威基因藥業有限公司,20g:200μg,批號:201405023A);京萬紅軟膏(天津達仁堂京萬紅藥業有限公司,20g,批號:211975);龍血竭-β-環糊精包合物凝膠劑高、中、低劑量(龍血竭含量分別為 5%、2.5%、1%);
昆明種小鼠(清潔級,雌雄各半,體重 20~30g,昆明醫科大學提供,合格證號 SCXK(滇)2011-0008)。ICR 小鼠{清潔級雄性,體重 20±2g,長沙市天勤生物技術有限公司提供,許可證號 SCXK(湘)2014-001。實驗動物環境及設施符合《中華人民共和國實驗動物規范》。
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2 實驗方法及結果

 

2.1 統計學數據處理方法
將昆明種小鼠 50 只,雌雄各半,雌雄分別按照隨機區組法隨機分組,分為5 組,每組 10 只,即陽性組、模型組、龍血竭-β-環糊精包合物凝膠高、中、低劑量組。將小鼠背部脫毛,腹腔麻醉,用 10N 硫酸浸泡的濾紙片(2cm×2cm)貼在小鼠背部 15s,2 小時后,小鼠背部出現水泡,對燙傷面進行病理組織學鑒定,造成Ⅱ度燙傷模型[26]。
模型組不用藥。按照創面大小 0.05g/cm2給藥[27],陽性組背部涂抹重組人表皮生長因子凝膠,龍血竭-β-環糊精包合物凝膠高、中、低劑量組分別涂抹龍血竭含量為 5%、2.5%、1%的龍血竭-β-環糊精包合物凝膠,每天 2 次,連續用藥10 天。
觀察皮膚創面結痂、脫痂、水腫和感染情況。記錄愈合時間。燒傷后 0、6、8、10 d 用透明硫酸紙描記創面,以此為模板,將質地均勻的硬紙板剪成同樣大小,然后用電子天平稱定質量,以質量代替面積,依據創面愈合率=(原始燙傷面積一未愈合面積)/原始燙傷面積,計算創傷愈合率。
與模型組相比,龍血竭-β-環糊精包合物凝膠高、中、低劑量組在第 6 天-10天小鼠創面愈合率均有不同程度升高。龍血竭-β-環糊精包合物凝膠高劑量組在第 6 天-10 天小鼠創面愈合率升高有顯著性差異(P<0.01),龍血竭-β-環糊精包合物凝膠中劑量組在第 8 天-10 天小鼠創面愈合率升高有顯著性差異(P<0.01),龍血竭-β-環糊精包合物凝膠低劑量組在第 10 天小鼠創面愈合率升高有顯著性差異(P<0.01)。結果表明:龍血竭-β-環糊精包合物凝膠具有提高燙傷小鼠皮膚創面愈合率的作用。見表 10。
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3 討論

 

1.小鼠燙傷模型一般是將小鼠背部脫毛麻醉后,固定于帶孔木板上,使脫毛皮膚裸露于木板孔內,再將木板置電熱恒溫水浴鍋上或恒溫電熱儀[37],使裸露的背部皮膚浸泡于沸水浴內,15-18s 取出,用干凈的紗布擦干,及造成Ⅱ度燙傷模型。本實驗預實驗時采取改良的此裝置進行試驗,將沸水注入試管中,再將試管置于小鼠皮膚上 15s,其致小鼠燙傷程度不一,差異性較大,故沒有用此方法。任秀奇在中國燒傷創瘍雜志中發表的《硫酸、氫氧化鈉、黃磷等化學物質燒傷對免疫功能的影響》提到硫酸、氫氧化鈉、黃磷等化學物質也可致Ⅱ度燙傷,且較易控制,所以本實驗采用硫酸致小鼠Ⅱ度燙傷模型。
申海艷等人在時珍國醫國藥中《海南血竭的抗菌活性成分研究》中對海南血竭的乙醇提取物乙酸乙酯部分的化學成分及其抗菌活性進行深入研究,共分離鑒定了 8 個化合物?;钚詼y試結果表明有 7 個化合物對金黃色葡萄球菌的生長有抑制作用。我們直接用不同濃度的凝膠劑進行了抑菌試驗,結果未發現抑菌作用。這表明龍血竭在該濃度下無抑菌作用,需要提純到單體后才可能顯示抑菌作用。經試驗證實龍血竭-β-環糊精包合物凝膠 3 個劑量組的燙傷小鼠的皮膚愈合時間均有不同程度的縮短,龍血竭-β-環糊精包合物凝膠 3 個劑量組在第 6天-10 天小鼠創面愈合率均有不同程度升高且對皮膚無刺激性作用,有顯著延長小鼠的疼痛反應潛伏期,減少小鼠扭體次數的作用,顯著延長小鼠的痛閾值,對二甲苯所致的小鼠耳腫脹有明顯的抑制作用。說明龍血竭-β-環糊精包合物凝膠劑具有促進皮膚創面愈合,鎮痛抗炎的作用,為進一步研發制劑的提供了藥理學依據。本實驗說明了為龍血竭-β-環糊精包合物凝膠可以作為燙傷藥,為之后燙傷的臨床研究提供了依據。由于條件限制,所做內容比較基礎,在之后的研究中可以注重皮膚給藥的長期毒性實驗,考察臨床用藥的安全性。
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參考文獻(略)

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